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质粒提取与纯化 — 我们不一样 质粒是细菌中独立于基因组DNA外的小型环状DNA分子,具有自主复制的能力,并能在子代细胞中维持稳定的拷贝数。质粒能够携带外源基因进入细菌中扩增或者表达,是最常用的外源基因载体,在分子克隆、重组病毒的制备、蛋白表达以及药物筛选等领域广泛应用。  生命科学实验室的“圣经”《分子克隆实验指南》中关于质粒提取的经典方法有碱裂解法和煮沸法等。传统的碱裂解法操作时间久,所得质粒量较多且蛋白质等杂质去除彻底,但实验过程中涉及酚氯仿的使用,不利于操作者的健康;煮沸法操作简单,时间短,但所得质粒纯度和产量均较低。随着分子生物学技术的发展,出现了很多商品化的质粒提取试剂盒,其中碱裂解法的试剂盒因简便有效最受欢迎。以碱裂解法为原理发展起来的商业化试剂盒主要有离心柱法和磁珠法两种,主要区别是采用不同的吸附材料进行质粒的分离。离心柱法利用特殊硅基质膜在不同pH值和盐离子浓度下对质粒的吸附能力不同而分离出质粒;磁珠法利用超顺磁性的硅羟基磁珠在高盐条件下吸附质粒,低盐条件下洗脱释放质粒的特性,分离纯化质粒。离心柱法与磁珠法提取质粒优缺点对比超顺磁性的硅羟基磁珠具有粒径小,比表面积大,磁分离速度快等特点,使得磁珠法的质粒提取试剂盒具有核酸吸附量多,分离洗涤更彻底,不需反复离心,既可手工操作也可配合自动化设备等优势,这也是越来越多的科研人员和工业客户选择磁珠法质粒...
发布时间: 2018 - 11 - 20
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