案例分享|东纳生物核酸提取磁珠在血浆游离DNA分离中的应用
游离DNA(Circulating free DNA,cfDNA),循环游离DNA,是释放到血浆中的降解的DNA片段。cfDNA存在于人体的各种体液中,随组织损伤、癌症和炎症反应等发生浓度变化。正常人体的cfDNA主要通过细胞凋亡过程中产生的长度约为166bp的小片段DNA。而在有严重器官损伤的人体中,会产生大量的死亡细胞,这时就会释放相对正常水平更多的cfDNA。
cfDNA检测是目前市场上最常见的液体活检形式,在疾病诊断和检测方面存在着巨大的潜力。虽然cfDNA的应用范围较广,但因其在血液中含量较低、样本采集和保存等因素的影响,导致cfDNA的提取并非易事,最常见的就是提取得率低。因此,如何提高cfDNA的得率就变得非常重要。
东纳磁珠客户应用案例1:
实验目的:测试东纳磁珠在提取血浆中游离DNA的效果
试用磁珠:东纳1μm硅羟基磁珠,批号:MBSi20210623-ZW-A
实验方法:按照客户游离DNA提取试剂盒操作流程,搭配东纳磁珠,分别采用全自动核酸提取仪和手动提取血浆游离DNA,并与进口血浆游离DNA提取试剂盒(磁珠法)对比。取2μL洗脱液进行QubitTM dsDNA HS Assay Kit定量和qPCR检测。
实验结果:Qubit和qPCR检测结果表明:东纳磁珠在全自动核酸提取仪和手动提取cfDNA表现都很优异,能达到进口磁珠的提取效果。
表1. 提取血浆游离DNA的结果
样本 | 提取方法 | 磁珠 | CT | Qubit(ng/μL) | V ( μL) | Total (ng) |
血 浆 | 全自动核酸提取 | 进口磁珠 | 29.05 | 0.0336 | 40 | 1.344 |
29.02 |
东纳磁珠 | 28.68 | 0.0644 | 40 | 2.576 |
28.48 |
手动提取 | 进口磁珠 | 28.17 | 0.0656 | 40 | 2.624 |
28.08 |
东纳磁珠 | 28.92 | 0.0852 | 40 | 3.408 |
28.63 |
东纳磁珠客户应用案例2:
实验条件:使用东纳磁珠和竞品磁珠,相同磁珠用量的情况下对200 μL血浆进行提取,洗脱体积为50 μL。取2 uL洗脱液进行QubitTM dsDNA HS Assay Kit定量检测。
实验结果:提取相同体积的血浆,东纳磁珠比竞品磁珠提取的游离DNA得率高。
表2. 提取200ul血浆游离DNA产量
1. 产品粒径均匀一致,可获得良好的重现性;
2. 超顺磁性,磁响应性时间短;
3. 可配合自动化仪器进行高通量操作,磁珠基本无残留。
货号 | MB1101 |
产品名称 | 1 μm硅羟基磁珠 |
磁含量 | 约25%-35% |
浓度 | 50 mg/mL |
颜色 | 棕黑色 |
平均粒径 | 1 μm |
保存溶液 | 纯水+0.02%防腐剂 |
用途 | 适用于游离DNA提取以及植物、质粒、土壤、血液、组织等样本的基因组提取 |