MagBeads®Oligo(dT)磁珠
【产品名称】MagBeads®Oligo(dT)磁珠
【英文名称】MagBeads®Oligo(dT) Magnetic Beads
【订货信息】
| 货号 | 产品名称 | 表面基团 | 规格 | 溶剂 | 浓度 |
MB1102-18a | MagBeads®Oligo(dT)磁珠 | Oligo(dT)18 | 1/5/10 mL | 保存液 | 5 mg/mL |
MB1102-18b |
MB1102-25a | Oligo(dT)25 |
MB1102-25b |
【成 分】Oligo(dT)磁珠分散在保存液中
【简 介】
东纳生物 MagBeads®Oligo(dT)磁珠具有合适的Oligo(dT)载量，尺寸约为1 μm，分散性好，具有较高的磁含量，磁响应速度快。通过磁珠表面的Oligo dT与mRNA尾部Ploy A之间互补配对，可以高效地从真核生物总RNA或直接从动植物组织、细胞中快速分离出完整、高纯度的mRNA。提取的mRNA可用于分子生物学的各种下游实验中，如RT-PCR、cDNA文库构建、Northern Blot分析、引物延伸、基因表达分析等。
【产品信息】
产品信息 | MB1102-18a | MB1102-18b | MB1102-25a | MB1102-25b |
Oligo(dT)载量 | ＞500 pmol / mg磁珠 |
浓度 | 5 mg/mL |
粒径 | 约1.0 μm |
磁含量 | 约35%-45% |
保存溶液 | TE，含0.1%BSA和0.01%P300作为防腐剂 |
保存条件 | 密封，2-8℃保存，禁止冷冻，使用前请充分混匀 |
包装 | 塑料瓶 |
【操作步骤】
1. 准备缓冲溶液和材料
1.1 缓冲液配制：用户可根据需要自行调整缓冲液配方（所有试剂需要使用DEPC处理的水配制）
溶液名称 | 溶液配方 |
结合缓冲液 | 100 mM Tris-HCl,pH7.5 500 mM LiCl 10 mM EDTA,pH8 1%LiDS 5 mM dithiothreitol |
洗涤缓冲液A | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5
0.15 M LiCl
1 mM EDTA
0.1% LiDS |
洗涤缓冲液B | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5
0.15 M LiCl
1 mM EDTA |
洗脱液 | 10 mM Tris-HCl pH 7.5 |
注：所有试剂使用时平衡至室温，如有沉淀，可37℃预热10 min。
1.2 RNase-free的1.5 mL离心管；
1.3 用于1.5 mL离心管的磁力架；
1.4 焦碳酸二乙酯（DEPC）水：向纯化水中加入终浓度0.1%(V/V) 的DEPC，混匀后放置过夜，高压灭菌。
1.5 水浴锅；
1.6 涡旋振荡器
1.7 旋转混合仪或摇床
2.清洗Oligo(dT)磁珠
2.1 彻底重悬试剂瓶中的Oligo(dT)磁珠（摇床振荡10 min或手动摇晃至充分混匀）。
2.2 将所需体积的Oligo(dT)磁珠转移到离心管中，加入结合缓冲液，使磁珠浓度为0.4 mg/mL。
2.3 将离心管置于磁力架上1 min，弃上清。
➢吸弃上清时，尽量吸净管盖及管底残液，请勿吸入磁珠。
2.4 将离心管从磁力架上取下，加入与初始体积相同体积的结合缓冲液，留作下一步备用。
3.从总RNA中纯化mRNA
3.1 将使用结合缓冲液洗涤并重悬的磁珠充分混匀后，取50 μL至离心管中。
3.2 样品准备：用DEPC水将10 μg总RNA样品的体积调整至50 μL，加入含50 μL磁珠的离心管中，移液器轻柔混匀。
3.3 样品置于PCR仪，65℃ 5 min，25℃ 5 min，4℃ hold。
3.4 磁分离，去上清，使用200 μL洗涤缓冲液A洗涤结合mRNA 的磁珠，移液器轻柔混匀，磁分离，去上清。
注意点：
➢完成清洗时务必清除所有洗涤缓冲液。
3.5 加入50 μL洗脱液，移液器轻柔混匀，将样品置于置于PCR仪，80℃ 2 min，25℃ hold。
3.6 加入50 μL结合液，移液器轻柔混匀，室温放置5 min；再磁分离，去上清。
3.7 加入200 μL洗涤液缓冲液A，移液器轻柔混匀，磁分离，去上清。
注意点：
➢完成清洗时务必清除所有洗涤缓冲液。
3.8 加入200 μL洗涤液缓冲液B，移液器轻柔混匀，磁分离，去上清。重复此步骤两次。
注意点：
➢完成清洗时务必清除所有洗涤缓冲液。
3.9 从磁力架上取下离心管，加入10 μL DEPC水或洗脱液，重悬磁珠，80℃ 2 min。
3.10 迅速使用磁力架收集上清，并将上清液转移至无RNase的离心管中，进行下游实验。
【注意事项】
1.尽量减少RNA降解；使用RNA时，请始终佩戴手套以尽量减少RNase污染；所有用于mRNA 提取的buffer和耗材都应该是RNase-free。
2.为减少磁珠损失，每次磁分离时间应不少于1 min。
3.在洗涤过程中彻底重新悬磁珠/mRNA复合物，并在每一步中完全去除洗涤缓冲液，以防止LiDS和其他盐携带到下游反应中。LiDS是酶促反应的强抑制剂。
4.如果纯化后的rRNA 残留量对下游应用过高，建议用新的磁珠进行第二轮纯化mRNA。
5.本产品仅供研究使用。
【生产单位】
注：提供工业级批量产品，可直接联系销售客服。
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